Phát hiện phương pháp mới cho phân tích toàn diện protein trong nước tiểu.

Các nhà nghiên cứu đã phát hiện ra một phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên alkyl hóa pha rắn (SPA) mới để xử lý chống nhiễu, tổn thất thấp đối với các mẫu proteomic dưới microgam. Nghiên cứu đã được công bố trên Tạp chí, URINE.’

Bởi vì nước tiểu có thể tích tụ và phản ánh những thay đổi trong cơ thể con người khi được thu thập không xâm lấn, nên nó là một trong những nguồn hấp dẫn nhất để phát hiện dấu ấn sinh học sớm và nhạy cảm. Mặt khác, phân tích hệ protein nước tiểu gặp khó khăn do phạm vi động rộng của nó, kéo dài khoảng 10 bậc độ lớn về nồng độ protein. Lượng protein dồi dào trong nước tiểu có thể che khuất các dấu hiệu sinh học của bệnh tiềm ẩn, khiến việc nhận dạng trở nên khó khăn. Để cải thiện việc phát hiện và xác định các dấu ấn sinh học khó nắm bắt này, các chiến lược phân đoạn và cạn kiệt thường được sử dụng trước khi thực hiện phân tích khối phổ (MS). Là một giải pháp thay thế đầy hứa hẹn, có thể sử dụng phân đoạn nước tiểu bằng siêu ly tâm (UC) để làm cạn kiệt các protein có hàm lượng cao, cho phép phân lập các exosome có độ tinh khiết cao trong khi vẫn giữ lại hầu hết các protein có hàm lượng cao trong phần nổi phía trên. Tuy nhiên, lực cắt ly tâm mạnh trong UC chắc chắn có thể phá vỡ cấu trúc nguyên vẹn của exosome, dẫn đến việc cô lập chỉ một lượng nhỏ từ một lượng nhỏ nước tiểu.

Có tính đến tất cả các hạn chế hiện có, một nhóm các nhà nghiên cứu ở Trung Quốc đã đề xuất một phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên alkyl hóa pha rắn (SPA) mới để xử lý các mẫu proteomic dưới microgam ít tổn thất và chống nhiễu. “Phương pháp của chúng tôi kết hợp phân đoạn UC, chuẩn bị mẫu chiết xuất pha rắn (SPA) và sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS) để cho phép lập hồ sơ hệ protein nước tiểu toàn diện, được gọi là CPU hoặc hồ sơ hệ protein nước tiểu toàn diện,” giải thích tương ứng. tác giả Huiming Yuan, giáo sư tại Viện Vật lý Hóa học Đại Liên, Viện Hàn lâm Khoa học Trung Quốc. “Chiến lược đơn giản này dẫn đến việc xác định tổng số 1.659 protein bằng cách sử dụng độ dốc LC ngắn khoảng 1 giờ, gấp 2,3 lần so với 730 protein được xác định từ nước tiểu thô chưa phân đoạn.”

Đáng chú ý, so với các phương pháp chuẩn bị mẫu nước tiểu hiện có, CPU mang lại những lợi thế đáng kể. Nó không chỉ giảm đáng kể thời gian phân tích xuống 3-4 lần mà còn tăng phạm vi nhận dạng protein nước tiểu lên 130% -160%. “Phương pháp này tiếp tục được sử dụng kết hợp với định lượng không ghi nhãn để tiến hành phân tích so sánh protein trong nước tiểu của cả bệnh nhân mắc bệnh thận IgA (IgAN) và người hiến tặng khỏe mạnh”, tác giả chính Xinxin Liu, kỹ thuật viên tại Viện Vật lý Hóa học Đại Liên, Trung Quốc chia sẻ. Học viện Khoa học. “Kết quả là, 227 protein được biểu hiện khác nhau đã được xác định, làm sáng tỏ các dấu ấn sinh học tiềm năng liên quan đến IgAN.”

Một số thành viên của họ chất mang chất hòa tan 22 (SLC22) đã được phát hiện là được điều chỉnh tăng ở bệnh nhân IgAN, cho thấy có thể có mối liên hệ với chức năng chuyển hóa thận bị suy giảm ở những người này. Nhóm đã báo cáo nghiên cứu của họ trên tạp chí KeAi Urine.

Liu kết luận: “Kết quả của chúng tôi cho thấy rằng phương pháp được phát triển của chúng tôi hứa hẹn là một công cụ có giá trị để phát hiện ra các dấu ấn sinh học liên quan đến bệnh tật trong nước tiểu”. ()